L'efficacité d'une colonne et l'élargissement des pics peuvent être améliorées en optimisant un certain nombre de paramètres.
La HEPT (hauteur équivalente de plateaux théoriques) en fonction du débit de la phase mobile passe par un minimum. Ce minimum est très faible en HPLC, si bien qu'il n'est pas possible techniquement de l'atteindre. Conclusion, en HPLC l'efficacité diminue avec l'augmentation du débit.
L'efficacité est améliorée :
- en diminuant la taille des particules (trajet parcouru plus long pour des petites particules)
- en augmentant la longueur de la colonne
Elargissement des pics : les solutés prennent des chemins différents dans la phase mobile, leur vitesse de progression n'est pas tout à fait identique d'où des pics qui s'élargissent avec le temps de rétention.
L'efficacité des colonnes capillaires est améliorée :
- en diminuant le diamètre interne de la colonne
- en diminuant la température de la colonne
- en optimisant le débit du gaz vecteur
- Epaisseur du film - de 0.1 à 5 µm : plus il est épais, plus la rétention est forte. On obtient une meilleure résolution mais un temps d'élution plus élevé. Un film épais est utilisé pour des composés volatils, ce qui permet de les retenir plus longtemps dans la colonne et donc de les séparer.