Point isobestique en spectroscopie

Dans les dosages par spectrophotométrie UV, lorsque l'on dose une espèce A susceptible de se transformer en une espèce B (dosage d'un acide faible par une base forte par exemple), on obtient un spectre du mélange A + B présentant un point commun pour différentes concentration en A et B. Ce point est appelé point isobestique. Les coefficients d'absorption molaire de A et B sont égaux et valent e_iso pour la longueur d'onde l_iso.

Le faisceau de spectres ci-dessus a été tracé avec une solution de bleu de bromothymol (BBT) à différents pH proche du virage. On fait donc varier la concentration de chaque espèce (acide et basique) tout en conservant la concentration totale constante.

L'absorbance en tout point du spectre vaut A= e_AlC_A + e_BlC_B or au point d'isobestique on a
e_iso = e_A = e_B d'où A= e_iso l(C_A+C_B).

L'absorbance du mélange de A et B reste constante si la concentration totale C_A+C_B est constante. Les proportions de A et de B sont indépendantes de l'absorbance.
Conclusion: au point isobestique, l'absorbance reste constante quelque soient les proportions en A et B si leur concentration totale reste constante. Cette propriété est utilisé pour l'étalonnage des spectromètres UV.