Les différentes techniques chromatographiques
Définition de la chromatographie
La chromatographie est une technique analytique qui permet la séparation,
l'identification et la quantification des différents composés d'un mélange. Elle est utilisée dans de nombreux domaines : chimie, biologie, l'alimentation,
la pharmacologie et plus largement dans les différentes disciplines scientifiques.
Il existe 3 grandes familles de chromatographie
- La chromatographie liquide haute performance (HPLC) est une technique qui utilise des colonnes remplies avec la phase sationnaire où circule la phase mobile grâce à une pompe. La chromatographie en phase inverse avec une colonne apolaire est la plus couramment employée. Elle permet d'analyser la majorité des molécules organiques : pesticides, drogues, principes actifs des médicaments, etc...
- La chromatographie en phase gazeuse (CPG) utilise une phase mobile gazeuse. Les colonnes sont généralement capillaires. La technique est utilisé pour les composés volatils. Plus simple à mettre en oeuvre que l'HPLC, elle est parfaitement adaptée à l'analyse de hydrocarbures, des huiles essentielles.
- La chromatographie sur couche mince (CCM) est une technique peu coûteuse où les composés du mélange sont élués sur une fine couche , généralement de silice ou d'alumine.
Pour les techniques utilisant de l'instrumentation (HPLC et CPG) on obtient un chromatogramme présentant des pics dont la surface est proportionnelle à la quantité d'analyte arrivant au détecteur. Ce dernier
En HPLC, on distingue 4 modes de séparation dont le choix dépendra des composés à analyser.
- d'adsorption
- de partage
- d'échange d'ions ou chromatographie ionique
- d'exclusion
L'HPLC et la CPG peuvent être couplées à un spectromètre de masse pour l'identification de composés inconnus. Pour l'exploiter pleinement il est important de connaitre les différentes grandeurs de rétention et d'utiliser des colonnes avec une bonne efficacité.
La chromatographie permet également d'effectuer des dosages avec une grande précision. Les principales méthodes de dosage sont la normalisation interne, la méthode des ajouts dosés et l'étalonnage interne. L'étalonnage externe peut également être effectué sous certaines conditions.